一、准备工作
微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：
1．红细胞悬液的制备：将受血者与献血者的红细胞和血浆分离，各取其压积红细胞10ul，分别加入含1.0－1.2毫升红细胞稀释液的两个试管中，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清。
二、操作步骤
1．将准备好的抗人球蛋白交叉配血卡做好标记。
2．将献血者红细胞悬液1滴（或50μl）与受血者血清1滴（或50μl）先后加入主侧管中。
3．将受血者红细胞悬液1滴（或50μl）与献血者血清1滴（或50μl）先后加入次侧管中。
4．加样后的试剂卡，置37℃孵育器中孵育15分钟。
5．使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出肉眼观察结果。
结果判定：
1．阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管底部，表明受血者与献血者血型相合。
2．阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，表明受血者与献血者血型不相合。
三、注意事项
1．应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。
2．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3．血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
4．如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。
5．每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
6．试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
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